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1. जैविक प्रणालियों में मेटाबोलाइट पूल के मापन के लिए मेटाबोलाइट प्रोफाइलिंग विधियां महत्वपूर्ण उपकरण हैं।जबकि अधिकांश मेटाबोलाइट प्रोफाइलिंग विधियां सापेक्ष तीव्रता की रिपोर्ट करती हैं या सभी मेटाबोलाइट्स का प्रतिनिधित्व करने वाले कुछ आंतरिक मानकों पर निर्भर करती हैं, जैविक कोशिकाओं और तरल पदार्थों में मेटाबोलाइट पूल के मात्रात्मक विवरण के लिए अंतिम आवश्यकता पूर्ण एकाग्रता निर्धारण है।हम यहां एक उच्च-थ्रूपुट और संवेदनशील गैस क्रोमैटोग्राफी/टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (जीसी/एमएस/एमएस) लक्षित मेटाबोलाइट प्रोफाइलिंग विधि की रिपोर्ट करते हैं जो सभी ज्ञात मेटाबोलाइट्स की पूर्ण मात्रा का ठहराव सक्षम करती है।यह विधि मिथाइल क्लोरोफॉर्मेट डेरिवेटाइजेशन और मेटाबोलाइट मानकों के साथ नमूनों को अलग करके ड्यूटेरेटेड डेरिवेटाइजेशन अभिकर्मकों के साथ व्युत्पन्न करके मात्रा निर्धारण पर आधारित है।पारंपरिक इलेक्ट्रॉन प्रभाव आयनीकरण को सकारात्मक रासायनिक आयनीकरण से बदल दिया गया है क्योंकि उत्तरार्द्ध काफी हद तक आणविक आयन और अन्य उच्च आणविक भार टुकड़ों को संरक्षित करता है।इससे कई कोइल्यूटिंग मेटाबोलाइट्स के बीच अद्वितीय एमएस/एमएस संक्रमणों का चयन करना आसान हो गया।वर्तमान में, नवीन जीसी/एमएस/एमएस पद्धति में 67 सामान्य प्राथमिक मेटाबोलाइट्स शामिल हैं, जिनमें से अधिकांश अमीनो और नॉनअमीनो कार्बनिक एसिड के समूहों से संबंधित हैं।हम मूत्र और सीरम नमूनों पर विधि की प्रयोज्यता दिखाते हैं।यह विधि अमीनो एसिड और नॉनअमीनो कार्बनिक एसिड की मात्रात्मक जीसी/एमएस मेटाबोलाइट प्रोफाइलिंग के लिए वर्तमान पद्धति का एक महत्वपूर्ण सुधार है।

2.24एस-हाइड्रॉक्सीकोलेस्ट्रोल (24ओएचसी) और 27-हाइड्रॉक्सीकोलेस्ट्रोल (27ओएचसी) अलग-अलग मूल के दो संरचनात्मक रूप से समान ऑक्सीस्टेरॉल हैं - पहला लगभग विशेष रूप से मस्तिष्क में बनता है और बाद वाला अधिकांश अन्य अंगों की तुलना में मस्तिष्क में कुछ हद तक बनता है।परीक्षण की जाने वाली परिकल्पना: न्यूरोनल क्षति और/या डिमाइलिनेशन के कारण मस्तिष्क से मस्तिष्कमेरु द्रव (CSF) में 24OHC का प्रवाह बढ़ जाता है, जबकि एक दोषपूर्ण रक्त-मस्तिष्क बाधा के कारण CSF में परिसंचरण से 27OHC का प्रवाह बढ़ जाता है। आइसोटोप कमजोर पड़ने वाला द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग विभिन्न न्यूरोलॉजिकल और जराचिकित्सा रोगों वाले 250 से अधिक रोगियों के सीएसएफ और प्लाज्मा में दो ऑक्सीस्टेरोल की जांच करने के लिए किया गया था। दो ऑक्सीस्टेरोल के सीएसएफ-स्तर प्लाज्मा स्तरों की तुलना में विभिन्न बीमारियों से बहुत अधिक प्रभावित थे।सक्रिय डिमाइलेटिंग रोगों वाले मरीजों में सीएसएफ में 24OHC का स्तर अपेक्षाकृत उच्च 24OHC/27OHC अनुपात के साथ बढ़ा हुआ था।सामान्य तौर पर मेनिनजाइटिस के मरीजों में दोनों स्टेरॉयड का उच्च स्तर और 24OHC/27OHC का अनुपात कम था।अल्जाइमर रोग के रोगियों में सीएसएफ में 24OHC का स्तर थोड़ा बढ़ा हुआ था जबकि 27OHC में कम वृद्धि हुई थी।मल्टीपल स्केलेरोसिस वाले मरीजों में उच्च 24OHC/ 27OHC अनुपात के साथ सक्रिय अवधि के दौरान 24OHC के उच्च स्तर की प्रवृत्ति होती है। CSF और प्लाज्मा में दो ऑक्सीस्टेरॉल का माप न्यूरोलॉजिकल रोगों के मूल्यांकन के लिए मौजूदा जैव रासायनिक तरीकों में महत्वपूर्ण योगदान दे सकता है।