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कपोसी के सार्कोमा-संबंधित हर्पीसवायरस (केएसएचवी) का ओआरएफ45 प्रोटीन एक गैमहेरपीसवायरस-विशिष्ट तत्काल-प्रारंभिक टेगुमेंट प्रोटीन है।हमारे पिछले अध्ययनों ने केएसएचवी संक्रमण के प्रारंभिक और अंतिम दोनों चरणों में इसकी महत्वपूर्ण भूमिका का खुलासा किया है।इस अध्ययन में, हमने मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के एक पैनल का उपयोग करके ORF45 के इंटरैक्टोम का सर्वेक्षण किया।पहले से पहचाने गए बाह्यकोशिकीय विनियमित किनेज़ (ईआरके) और पी90 राइबोसोमल एस6 किनेज़ (आरएसके) प्रोटीन के अलावा, हमें कई अन्य शुद्धीकृत प्रोटीन मिले, जिनमें प्रमुख ∼38 केडीए और ∼130 केडीए शामिल हैं।मास स्पेक्ट्रोमेट्री से पता चला कि 38-केडीए प्रोटीन वायरल ओआरएफ33 है और 130-केडीए प्रोटीन सेलुलर यूएसपी7 (यूबिकिटिन-विशिष्ट प्रोटीज़ 7) है।हमने ORF33-बाइंडिंग डोमेन को ORF45 के अत्यधिक संरक्षित कार्बोक्सिल-टर्मिनल 19 अमीनो एसिड (एए) और यूएसपी7-बाइंडिंग डोमेन को ORF45 के मध्य क्षेत्र में रिपोर्ट की गई सर्वसम्मति रूपांकनों के लिए मैप किया।इम्यूनोफ्लोरेसेंस स्टेनिंग का उपयोग करते हुए, हमने ट्रांसफ़ेक्टेड कंडीशन आयनों और केएसएचवी-संक्रमित कोशिकाओं दोनों में ORF33 या USP7 के साथ ORF45 का कोलोकलाइज़ेशन देखा।इसके अलावा, हमने नाभिक से साइटोप्लाज्म तक ORF33/USP7 के एक हिस्से का ORF45-निर्भर स्थानांतरण देखा।हमने पाया कि ORF45 ने ORF33 प्रोटीन संचय में वृद्धि का कारण बना, जिसे ORF45 में ORF33- या USP7-बाध्यकारी डोमेन हटा दिए जाने पर समाप्त कर दिया गया था।इसके अलावा, KSHV जीनोम में ORF45 के संरक्षित कार्बोक्सिल टर्मिनस को हटाने से KSHV-संक्रमित कोशिकाओं में ORF33 प्रोटीन का स्तर काफी कम हो गया और संतान विषाणुओं का उत्पादन समाप्त हो गया।सामूहिक रूप से, हमारे परिणाम न केवल ORF45 इंटरैक्टोम के नए घटकों को प्रकट करते हैं, बल्कि यह भी प्रदर्शित करते हैं कि इन प्रोटीनों के बीच परस्पर क्रिया KSHV लिटिक प्रतिकृति के लिए महत्वपूर्ण है। कपोसी का सारकोमा-संबंधित हर्पीसवायरस (KSHV) कई मानव कैंसर का प्रेरक एजेंट है।KSHV ORF45 एक बहुक्रियाशील प्रोटीन है जो KSHV लिटिक प्रतिकृति के लिए आवश्यक है, लेकिन सटीक तंत्र जिसके द्वारा ORF45 अपने महत्वपूर्ण कार्य करता है, अस्पष्ट है।हमारे पिछले अध्ययनों से पता चला है कि कोशिकाओं में सभी ORF45 प्रोटीन उच्च-आणविक-भार परिसरों में मौजूद हैं।इसलिए हमने लिटिक प्रतिकृति के दौरान इसकी भूमिकाओं में अंतर्दृष्टि प्रदान करने के लिए ORF45 के इंटरैक्टोम को चिह्नित करने की मांग की।मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के एक पैनल का उपयोग करके, हमने केएसएचवी-संक्रमित कोशिकाओं में ओआरएफ45 इंटरैक्टोम का सर्वेक्षण किया।हमने ORF45 के दो नए बाइंडिंग साझेदारों की पहचान की: वायरल प्रोटीन ORF33 और सेलुलर यूबिकिटिन-विशिष्ट प्रोटीज़ 7 (USP7)।हम आगे प्रदर्शित करते हैं कि KSHV वायरल कणों के कुशल उत्पादन के लिए ORF45 और ORF33 के बीच की बातचीत महत्वपूर्ण है, यह सुझाव देते हुए कि इस बातचीत के साथ लक्षित हस्तक्षेप KSHV लिटिक प्रतिकृति को बाधित करने के लिए एक नई रणनीति का प्रतिनिधित्व कर सकता है।