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अन्य पॉजिटिव-स्ट्रैंड आरएनए वायरस के समान, टॉम्बसविरस को झिल्ली-बाउंड वायरल रेप्लिकाज़ कॉम्प्लेक्स (वीआरसी) द्वारा दोहराया जाता है।वीआरसी में पी92 वायरस-कोडित आरएनए-निर्भर आरएनए पोलीमरेज़ (आरडीआरपी), वायरल पी33 आरएनए चैपरोन और कई सह-ऑप्टेड होस्ट प्रोटीन शामिल हैं।इसके अनुवाद के बाद एक कार्यात्मक आरडीआरपी बनने के लिए, पी92 प्रतिकृति प्रोटीन को वीआरसी में शामिल किया जाना चाहिए, इसके बाद इसका सक्रियण किया जाना चाहिए।हमने पहले सेल-फ्री यीस्ट एक्सट्रैक्ट-आधारित परख में दिखाया है कि टोमेटो बुशी स्टंट वायरस (टीबीएसवी) आरडीआरपी की सक्रियता के लिए घुलनशील मेजबान कारक की आवश्यकता होती है।इस लेख में, हम एन-टर्मिनली ट्रंकेटेड रीकॉम्बिनेंट टीबीएसवी आरडीआरपी के सक्रियण के लिए आवश्यक सह-ऑप्टेड होस्ट कारक के रूप में सेलुलर हीट शॉक प्रोटीन 70 (एचएसपी70) की पहचान करते हैं।इसके अलावा, Hsp70 फ़ंक्शन का छोटा-अणु-आधारित अवरोधन इन विट्रो में टॉम्बसवायरस RdRp द्वारा RNA संश्लेषण को रोकता है।इसके अलावा, हम दिखाते हैं कि तटस्थ फॉस्फोलिपिड, अर्थात्, फॉस्फेटिडाइलथेनॉलमाइन (पीई) और फॉस्फेटिडिलकोलाइन (पीसी), इन विट्रो में आरडीआरपी सक्रियण को बढ़ाते हैं।इसके विपरीत, फॉस्फेटिडिलग्लिसरॉल (पीजी) इन विट्रो आरडीआरपी सक्रियण पर एक मजबूत और प्रमुख निरोधात्मक प्रभाव दिखाता है।हम यह भी प्रदर्शित करते हैं कि पीई और पीसी आरडीआरपी-वायरल प्लस-स्ट्रैंड आरएनए [(+)आरएनए] इंटरैक्शन को उत्तेजित करते हैं, जबकि पीजी वायरल आरएनए को आरडीआरपी से बांधने से रोकता है।टॉम्बसवायरस आरडीआरपी सक्रियण में विभिन्न फॉस्फोलिपिड्स की उत्तेजक बनाम निरोधात्मक भूमिकाओं के आधार पर, हम प्रस्ताव करते हैं कि संक्रमण के दौरान नए वीआरसी असेंबली को विनियमित करने के लिए लक्षित उपकोशिकीय झिल्ली की लिपिड संरचना का उपयोग टॉम्बसवायरस द्वारा किया जा सकता है। वायरस-कोडित आरएनए-निर्भर आरएनए पोलीमरेज़ (आरडीआरपी), जो कई पॉजिटिव-स्ट्रैंड आरएनए वायरस की संक्रमित कोशिकाओं में वायरल आरएनए संतान को संश्लेषित करने के लिए जिम्मेदार है, शुरू में निष्क्रिय है।इस रणनीति से साइटोसोल में वायरल आरएनए संश्लेषण से बचने की संभावना है जो आरएनए-ट्रिगर सेलुलर एंटीवायरल प्रतिक्रियाओं को तेजी से प्रेरित करेगा।झिल्ली-बद्ध प्रतिकृति कॉम्प्लेक्स के संयोजन के दौरान, वायरल आरडीआरपी एक अपूर्ण रूप से समझी जाने वाली प्रक्रिया के माध्यम से सक्रिय हो जाता है जो आरडीआरपी को आरएनए संश्लेषण के लिए सक्षम बनाता है।टीबीएसवी आरडीआरपी का उपयोग करके, हम दिखाते हैं कि सहयोजित सेलुलर एचएसपी70 चैपरोन और तटस्थ फॉस्फोलिपिड इन विट्रो में आरडीआरपी सक्रियण की सुविधा प्रदान करते हैं।इसके विपरीत, फॉस्फेटिडिलग्लिसरॉल (पीजी) का इन विट्रो आरडीआरपी सक्रियण और आरडीआरपी-वायरल आरएनए इंटरैक्शन पर एक प्रमुख निरोधात्मक प्रभाव होता है, जो बताता है कि आरडीआरपी के आसपास का झिल्लीदार माइक्रोडोमेन आरएनए संश्लेषण के लिए इसकी क्षमता को बहुत प्रभावित करता है।इस प्रकार, वायरल आरडीआरपी की सक्रियता संभवतः संक्रमित कोशिकाओं में कई मेजबान घटकों पर निर्भर करती है।