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5-मिथाइलटेट्राहाइड्रॉफ़ोलेट फोलिक एसिड का सबसे जैविक रूप से सक्रिय और कार्यात्मक रूप है।यह फोलिक एसिड के लिए शारीरिक चयापचय में भाग लेने का एकमात्र तरीका है।यह मुक्त फोलिक एसिड का एकमात्र रूप है जो पशु प्लाज्मा और कोशिकाओं में दिखाई देता है।इसका उपयोग मुख्य रूप से भ्रूण के न्यूरल ट्यूब दोष और धमनीकाठिन्य को रोकने, मेगालोब्लास्टिक एनीमिया का इलाज करने, फ्लोरिनेटेड पाइरीमिडीन के चिकित्सीय प्रभाव को बढ़ाने और सोरायसिस और रुमेटीइड गठिया जैसे ऑटोइम्यून रोगों के इलाज के लिए दवाओं और खाद्य योजकों के सक्रिय तत्व के रूप में किया जाता है।