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हमारे आसपास ऐसे कई गुमनाम नायक हैं, जो देखने में तो साधारण लगते हैं, लेकिन असल में वे चुपचाप हमारे लिए बहुत बड़ा योगदान देते हैं।प्रोटीनेज़ K आणविक निदान उद्योग में "गुमनाम नायक" है, हालांकि उद्योग में "बड़े और शक्तिशाली" की तुलना में, प्रोटीनेज़ K इतना कम महत्वपूर्ण है कि हमने लंबे समय तक इसके महत्व को नजरअंदाज कर दिया है।नए मुकुट महामारी के प्रकोप के साथ, प्रोटीनएज़ K की मांग बढ़ गई है, और देश और विदेश में आपूर्ति खपत से बहुत पीछे है, और सभी को अचानक एहसास हुआ कि प्रोटीनएज़ K इतना महत्वपूर्ण है।
प्रोटीनएज़ K का उपयोग क्या है?
प्रोटीनेज़ K प्रोटियोलिटिक एंजाइम गतिविधि वाला एक सेरीन प्रोटीज़ है और यह वातावरण की एक विस्तृत श्रृंखला (पीएच (4-12.5), उच्च-नमक बफर, 70 डिग्री सेल्सियस का उच्च तापमान, आदि) में गतिविधि बनाए रख सकता है।इसके अलावा, प्रोटीनएज़ K की गतिविधि एसडीएस, यूरिया, EDTA, गुआनिडीन हाइड्रोक्लोराइड, गुआनिडीन आइसोथियोसाइनेट, आदि द्वारा बाधित नहीं होती है, और डिटर्जेंट की एक निश्चित मात्रा भी प्रोटीनएज़ K की गतिविधि को बढ़ा सकती है। चिकित्सा उपचार में (वायरस और माइक्रोबियल कीटाणुशोधन) ), भोजन (मांस कोमलीकरण), चमड़ा (बाल मुलायम करना), वाइन बनाना (अल्कोहल स्पष्टीकरण), अमीनो एसिड तैयार करना (अपघटित पंख), न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण, स्वस्थानी संकरण, आदि, प्रोटीनएज़ के अनुप्रयोग हैं।सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला अनुप्रयोग न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण है।
प्रोटीनेज़ K नमूने में सभी प्रकार के प्रोटीनों को एंजाइमोलाइज़ कर सकता है, जिसमें वे हिस्टोन भी शामिल हैं जो न्यूक्लिक एसिड से कसकर बंधे होते हैं, ताकि न्यूक्लिक एसिड को नमूने से निकाला जा सके और अर्क में छोड़ा जा सके, जिससे निष्कर्षण और शुद्धिकरण के अगले चरण की सुविधा मिल सके।वायरल न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने में, प्रोटीनेज़ K वायरस सैंपलिंग समाधान में महत्वपूर्ण घटकों में से एक है।प्रोटीनेज़ K वायरस के कोट प्रोटीन को तोड़ और निष्क्रिय कर सकता है, जो परिवहन और पता लगाने के चरण के दौरान अधिक सुरक्षित है;इसके अलावा, प्रोटीनएज़ K, RNase को भी ख़राब कर सकता है, वायरल RNA के क्षरण को रोकता है और न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने की सुविधा प्रदान करता है।
प्रोटीनएज़ के की रातों-रात प्रसिद्धि
चाहे वैज्ञानिक अनुसंधान के क्षेत्र में हो या आईवीडी के क्षेत्र में, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण सबसे बुनियादी प्रयोग है, इसलिए प्रोटीनएज़ K हमेशा एक बहुत महत्वपूर्ण अस्तित्व रहा है।हालाँकि, अतीत में, प्रोटीनेज़ K अपनी भूमिका से बहुत कम प्रसिद्ध था।इसका एक बड़ा कारण यह था कि प्रोटीनेज़ K की आपूर्ति और मांग का संबंध बहुत स्थिर था।कुछ लोग सोचते होंगे कि प्रोटीनेज़ K की आपूर्ति एक समस्या होगी।
नए मुकुट महामारी के प्रकोप के साथ, न्यूक्लिक एसिड परीक्षण की मांग बढ़ गई है।जून 2020 के अंत तक, चीन ने लगभग 90 मिलियन नए क्राउन परीक्षण पूरे कर लिए हैं, और यह संख्या वैश्विक स्तर पर और भी अधिक चिंताजनक है।न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्रयोगों में, प्रोटीनएज़ K की कार्यशील सांद्रता लगभग 50-200 μg/mL है।आम तौर पर, न्यूक्लिक एसिड का एक नमूना निकालने में लगभग 100 μg प्रोटीनेज़ K लगता है।वास्तविक उपयोग में, न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण की दक्षता बढ़ाने के लिए, अक्सर प्रोटीनेज़ K का उपयोग बढ़ी हुई मात्रा में किया जाएगा।नए कोरोनोवायरस के न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने से बड़ी मात्रा में प्रोटीनएज़ K की मांग आई है।प्रोटीनेज़ K की मूल आपूर्ति और मांग संतुलन जल्दी ही टूट गया, और प्रोटीनेज़ K रातोंरात एक महत्वपूर्ण महामारी रोकथाम सामग्री बन गया।
प्रोटीनेज़ K के उत्पादन में कठिनाइयाँ
हालाँकि महामारी के विकास के साथ, प्रोटीनेज़ K के महत्वपूर्ण मूल्य को लोगों द्वारा महत्व दिया गया है, यह शर्मनाक है कि प्रोटीनेज़ K की अत्यधिक कम-कुंजी के कारण, कुछ घरेलू कंपनियाँ प्रोटीनेज़ K के उत्पादन में शामिल हो गई हैं। प्रोटीनएज़ K उत्पादन स्थापित करना चाहते हैं। उत्पादन प्रक्रिया के दौरान, यह पता चला कि प्रोटीनेज़ K एक अत्यंत विशेष प्रोटीन है।कम समय में प्रोटीनएज़ K की उत्पादन क्षमता का विस्तार करना बेहद चुनौतीपूर्ण है।
प्रोटीनएज़ K के बड़े पैमाने पर उत्पादन में निम्नलिखित कठिनाइयों का सामना करना पड़ता है
1. कम अभिव्यक्ति
प्रोटीनेज़ K अधिकांश प्रोटीनों को गैर-विशेष रूप से क्षीण कर सकता है और अभिव्यक्ति मेजबान कोशिका में गंभीर विषाक्तता पैदा कर सकता है।इसलिए, प्रोटीनेज़ K का अभिव्यक्ति स्तर आम तौर पर बहुत कम होता है।प्रोटीनेज़ K को अत्यधिक व्यक्त करने वाली अभिव्यक्ति प्रणालियों और उपभेदों की स्क्रीनिंग के लिए आम तौर पर एक लंबे चक्र की आवश्यकता होती है।
2. पिगमेंट और न्यूक्लिक एसिड के अवशेष
बड़े पैमाने पर किण्वन से बड़ी मात्रा में वर्णक और मेजबान न्यूक्लिक एसिड अवशेष निकलते हैं।सरल शुद्धिकरण प्रक्रिया से इन अशुद्धियों को दूर करना कठिन है, और जटिल शुद्धिकरण से लागत बढ़ जाती है और पुनर्प्राप्ति दर कम हो जाती है।
3. अस्थिरता
प्रोटीनेज़ K पर्याप्त रूप से स्थिर नहीं है, यह स्वयं को एंजाइमोलाइज़ कर सकता है, और इसे सुरक्षात्मक एजेंट के बिना लंबे समय तक 37°C पर स्थिर रूप से संग्रहीत करना मुश्किल है।
4. अवक्षेपित होना आसान
प्रोटीनेज़ K का फ़्रीज़-सूखा पाउडर तैयार करते समय, यह सुनिश्चित करने के लिए कि फ़्रीज़-सूखे पाउडर में प्रोटीनेज़ K की ठोस सामग्री बड़ी है, उच्च सांद्रता पर फ़्रीज़-सूखे सुरक्षात्मक एजेंट को जोड़ना आवश्यक है, लेकिन जब प्रोटीनएज़ K की सांद्रता 20mg/mL और उससे अधिक तक पहुँच जाती है, यह आसान है एकत्रीकरण एक अवक्षेप बनाता है, जो उच्च ठोस सामग्री के साथ प्रोटीनेज़ K के फ़्रीज़-सुखाने में बड़ी कठिनाइयाँ लाता है।
5. बड़ा निवेश
प्रोटीनेज़ K में मजबूत प्रोटीज़ गतिविधि होती है और यह प्रयोगशाला में अन्य प्रोटीज़ को हाइड्रोलाइज़ कर सकता है।इसलिए, प्रोटीनेज़ K को अनुसंधान और विकास और उत्पादन के लिए विशेष उत्पादन क्षेत्रों, उपकरणों और कर्मियों की आवश्यकता होती है।
XD BIOCHEM का प्रोटीनेज़ K समाधान
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM के तकनीकी समाधानों में शामिल हैं
मल्टी-कॉपी प्लास्मिड एकीकरण का उपयोग करके, 8g/L के अभिव्यक्ति स्तर के साथ उच्च-अभिव्यक्ति उपभेदों का चयन किया जाता है, जो प्रोटीनएज़ K के कम अभिव्यक्ति स्तर की समस्या को दूर करता है;
एक बहु-चरण शुद्धिकरण प्रक्रिया की स्थापना के माध्यम से, प्रोटीनएज़ K के मेजबान साइटोक्रोम और न्यूक्लिक एसिड अवशेषों को मानक मूल्य से नीचे सफलतापूर्वक हटा दिया गया;
सुरक्षात्मक बफर फॉर्मूलेशन की उच्च-थ्रूपुट स्क्रीनिंग के माध्यम से, एक बफर का चयन किया गया जो 37°C पर प्रोटीनएज़ K को स्थिर रूप से संग्रहीत कर सकता है;
स्क्रीनिंग बफ़र्स इस समस्या को दूर करते हैं कि प्रोटीनएज़ K को एकत्र करना और उच्च सांद्रता में अवक्षेपित करना आसान है, और प्रोटीनएज़ K की उच्च ठोस सामग्री को फ़्रीज़-सुखाने की नींव रखता है।

XD बायोकेम प्रोटीनेज़ K नमूना

XD BIOCHEM प्रोटीनेज़ K स्थिरता परीक्षण: कमरे के तापमान पर 80 दिन के बाद गतिविधि में कोई महत्वपूर्ण बदलाव नहीं होगा

XD BIOCHEM प्रोटीनेज़ K स्थिरता परीक्षण: कमरे के तापमान पर 80 दिन के बाद गतिविधि में कोई महत्वपूर्ण बदलाव नहीं होगा

XD BIOCHEM प्रोटीनेज़ K और प्रतिस्पर्धी उत्पादों के न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण प्रभाव की तुलना।न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण की प्रक्रिया में, क्रमशः XD BIOCHEM और प्रतिस्पर्धी प्रोटीनेज़ K का उपयोग किया जाता है।XD BIOCHEM प्रोटीनेज़ K की निष्कर्षण दक्षता अधिक है और लक्ष्य जीन का Ct मान कम है।