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5-फ्लूरोरासिल (5-एफयू) और दो अंतर्जात मोनोफॉस्फेट न्यूक्लियोटाइड के कई मेटाबोलाइट्स को विशेष रूप से निर्धारित करने के लिए, हमने तरल क्रोमैटोग्राफी-टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस/एमएस) पर आधारित एक मूल विधि विकसित की।इस परख ने इसके निर्धारण की अनुमति दी: (i) 5-एफयू या 5-फ्लोरो-2′-डीऑक्सीयूरिडीन-5′-मोनोफॉस्फेट (5-एफडीयूएमपी) का 5-एफयू या 5-फ्लोरो-2′-डीऑक्सीयूरिडीन (5-एफडीयूआरडी) से इंट्रासेल्युलर उत्पादन। , (ii) इंट्रासेल्युलर 2′-डीऑक्सीयूरिडीन-5′-मोनोफॉस्फेट (dUMP)/थाइमिडीन-5′-मोनोफॉस्फेट (TMP) अनुपात पर 5-FdUMP सांद्रता का प्रभाव, और (iii) 5-FdUMP की स्राव सीमा और एबीसी ट्रांसपोर्टरों द्वारा मानव संवर्धित कोशिकाओं से 5-एफयू।हमारी प्रायोगिक स्थितियों के तहत, कोशिकाओं को 5-एफयू या 5-एफयूआरडी के साथ ऊष्मायन किया गया था।फिर, सेलुलर प्रोटीन को मेथनॉल द्वारा अवक्षेपित किया गया।इस प्रक्रिया ने उच्च निष्कर्षण पुनर्प्राप्ति प्रदान की।इसके अलावा, कोशिकाओं से 5-एफयू और 5-एफडीयूएमपी स्राव को मापने के लिए, हमने संस्कृति माध्यम में इन अणुओं की मात्रा का ठहराव किया।मीडिया को या तो सीधे इंजेक्ट किया गया (5-FU) या ओएसिस वैक्स एक्सट्रैक्शन कार्ट्रिज (5-FdUMP) का उपयोग करके एक ठोस चरण निष्कर्षण किया गया।मोबाइल चरण के रूप में अमोनियम फॉर्मेट बफर/मेथनॉल/पानी (5/5/90, वी/वी) का उपयोग करके आइसोक्रेटिक मोड के साथ डीसी18 अटलांटिस 3.5 माइक्रोन, (100 मिमी × 2.1 मिमी आईडी) कॉलम पर एनालिटिक्स का पृथक्करण किया गया था।रन टाइम 6.2 मिनट से अधिक नहीं था.एनालिटिक्स को नकारात्मक आयन मोड के तहत एक इलेक्ट्रोस्प्रे इंटरफ़ेस में आयनित किया गया था।हमने यौगिकों के अनुसार 2.5-150 एनजी एमएल -1 की सीमा पर विधि को मान्य किया।सात दिनों में इंट्रा- और अंतर-परख परिवर्तनशीलता 10% से कम थी।जब नमूनों को कम से कम दो सप्ताह के लिए -20 डिग्री सेल्सियस पर और तीन फ्रीज-पिघलना चक्रों के बाद संग्रहीत किया गया था, तो सभी यौगिक कोशिकाओं या संस्कृति माध्यम में स्थिर थे।दोनों मीडिया में कोई मैट्रिक्स प्रभाव नहीं देखा गया।