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एन्थ्रानिलिक एसिड और प्रतिदीप्ति पहचान के साथ व्युत्पन्नीकरण पर आधारित ग्लाइकोसिलट्रांसफेरेज़ के लिए नई उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी परख।

उच्च-प्रदर्शन वाले तरल द्वारा β1-4 गैलेक्टोसिलट्रांसफेरेज़ (GalT-1) और α2-6 सियालिलट्रांसफेरेज़ (ST-6) दोनों की गतिविधियों को मापने के लिए 2-एमिनोबेंज़ोइक एसिड (2AA; एंथ्रानिलिक एसिड, AA) की अनूठी लेबलिंग रसायन विज्ञान का उपयोग करके परख विकसित की गई थी। प्रतिदीप्ति पहचान के साथ क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) (एनुमुला केआर। 2006। ग्लाइकोप्रोटीन कार्बोहाइड्रेट के उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफिक विश्लेषण के लिए प्रतिदीप्ति व्युत्पन्नकरण विधियों में प्रगति। गुदा बायोकेम। 350:1-23)।एन-एसिटाइलग्लुकोसामाइन (जीएलसीएनएसी) और एन-एसिटाइलेक्टोसामाइन का उपयोग क्रमशः स्वीकर्ता के रूप में किया गया था और यूरिडीन डाइफॉस्फेट (यूडीपी) -गैलेक्टोज और साइटिडीन मोनोफॉस्फेट (सीएमपी) -एन-एसिटाइलन्यूरैमिनिक एसिड (एनएएनए) को क्रमशः गैलटी-1 और एसटी-6 के लिए दाता के रूप में इस्तेमाल किया गया था।एंजाइमैटिक उत्पादों को एए के साथ सीटू में लेबल किया गया था और सामान्य-चरण स्थितियों का उपयोग करके टीएसकेजेल एमाइड 80 कॉलम पर सब्सट्रेट्स से अलग किया गया था।एंजाइम इकाइयों को सहवर्ती व्युत्पन्न मानकों गैल-β1-4GlcNAc और NANA-α2-6 गैल-β1-4GlcNAc के साथ तुलना करके चरम क्षेत्रों से निर्धारित किया गया था।रैखिकता (समय और एंजाइम एकाग्रता), परिशुद्धता (इंट्रा- और इंटरसे) और परख के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता स्थापित की गई थी।अलगाव और शुद्धिकरण के दौरान एंजाइम गतिविधियों की निगरानी में परखें उपयोगी पाई गईं।परीक्षण अत्यधिक संवेदनशील थे और पारंपरिक रेडियोधर्मी चीनी-आधारित मापों के बराबर या उससे बेहतर प्रदर्शन करते थे।परख प्रारूप का उपयोग अन्य ट्रांसफरेज़ की गतिविधि को मापने के लिए भी किया जा सकता है, बशर्ते कि कार्बोहाइड्रेट स्वीकर्ता में लेबलिंग के लिए एक कम करने वाला अंत हो।आईजीजी का उपयोग करके ग्लाइकोप्रोटीन स्वीकर्ता के लिए एक परख विकसित की गई थी।आईजीजी ग्लाइकन्स (बायेंटेनरी जी0, जी1, जी2, मोनो- और डिसियलिलेटेड) को अलग करने के लिए एक लघु एचपीएलसी प्रोफाइलिंग विधि विकसित की गई थी, जिससे तेजी से गैलटी-1 और एसटी-6 गतिविधियों के निर्धारण में सुविधा हुई।इसके अलावा, यह प्रोफाइलिंग विधि नैदानिक ​​​​सेटिंग्स में आईजीजी ग्लाइकेन्स में परिवर्तन की निगरानी के लिए उपयोगी साबित होनी चाहिए।